O exame Papanicolau é considerado um método eficaz para prevenção e detecção precoce do câncer do colo do útero. Objetivou-se avaliar o conhecimento de mulheres na faixa etária entre 25 e 64 anos usuárias da Unidade de Saúde da Família Dona Zezita de Mato Verde em relação à prática do exame preventivo do câncer do colo do útero. Trata-se de um estudo descritivo de abordagem qualitativa realizado com 15 mulheres com idade entre 25 e 57 anos. Os dados foram coletados no período de agosto a setembro de 2019 por meio de uma entrevista semi-estruturada e analisados mediante Análise Temática. Os resultados mostraramque as mulheres recebem informações claras em relação ao exame preventivo, contudo, ainda falta ações mais específicas para atraí-las a realizar o exame. Entendem que o exame preventivo é importante para prevenção do câncer do colo do útero e é uma oportunidade para identificar Infecções Sexualmente Transmissíveis. Apresentam como dificuldades para realizar o exame desconforto pela posição assumida para coleta do material, a baixa flexibilidade no agendamento e horários das consultas, além dos sentimentos devergonha/timidez, invasão de privacidade e insegurança. Os resultados reforçam a necessidade de criar estratégias para disseminar informações a respeito do exame preventivo para que sintam seguras ao realizá-lo, além de esclarecê-las sobre o procedimento e flexibilizar a agenda do profissional para atender a demanda.